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Title Page

Contents

1. Introduction 8

2. Materials and Methods 11

2.1. Patient samples 11

2.2. RNA extraction, complementary DNA synthesis and relative quantitative reverse transcription polymerase chain reaction 11

2.3. JAK2 and CALR mutation analysis 12

2.4. Statistical analysis: 12

3. Results 15

3.1. Comparisons of the expression of miR-29a, miR-29b and miR-29c according to MPN subtypes and control 15

3.2. Comparisons the expression of miR-29a, miR-29b and miR-29c according to JAK2 V617F and CALR mutational status 15

3.3. Association of miR-29 expression with hematologic parameters or bone marrow fibrosis grade 16

4. Discussion 31

5. Summary 35

References 36

Abstract 40

초록 42

저자 약력 44

논문 및 저서 44

List of Tables

Table 1. Target Sequence of Mature MicroRNAs and Product Information of Primers Used for Real-Time PCR 14

List of Figures

Figure 1. The comparisons of expression of miR-29a among PV, ET, PMF and normal control groups 17

Figure 2. The comparisons of expression of miR-29b among PV, ET, PMF and normal control groups 18

Figure 3. The comparisons of expression of miR-29c among PV, ET, PMF and normal control groups 19

Figure 4. The relative expression of miR-29 family in PV, ET, PMF compared to normal control 20

Figure 5. The comparison of expression of miR-29a between JAK2V617F positive and negative MPN patients 21

Figure 6. The comparison of expression of miR-29b between JAK2V617F positive and negative MPN patients 22

Figure 7. The comparison of expression of miR-29c between JAK2V617F positive and negative MPN patient 23

Figure 8. The comparison of expression of miR-29a between CALR positive and negative MPN patients 24

Figure 9. The comparison of expression of miR-29b between CALR positive and negative MPN patients 25

Figure 10. The comparison of expression of miR-29c between CALR positive and negative MPN patients 26

Figure 11. The correlations between WBC count and expression of (A) miR-29a, (B) miR-29b and (C) miR-29c in MPN patients 27

Figure 12. The correlations between hemoglobin leveland expression of (A) miR-29a, (B) miR-29b and (C) miR-29c in MPN patients 28

Figure 13. The correlations between platelet count and expression of (A) miR-29a, (B) miR-29b and (C) miR-29c in MPN patients 29

Figure 14. The relative expression of miR-29a,miR-29b and miR-29c compared to normal control in three groups according to bone... 30

초록보기

 다양한 혈액 종양에서 microRNA (miR)-29 family의 이상발현이 보고되었고, 대부분 암억제인자로 작용한다. 그러나, 혈액증식종양에서 miR-29 family 발현에 관한 연구는 지금까지 보고된 바가 없다. 본 연구에서는 혈액증식종양에서 miR-29 family의 발현양상과 함께 여러 혈액학적 지표들과의 상관성을 알아보고자 하였다. 총 51명의 골수증식종양(진성적혈구증가증 15명, 진성혈소판증가증 26명, 일차골수섬유증 10명) 환자와 24명의 정상 대조군에서 수집된 포르말린 고정 파라핀 포매 골수 조직에서 실시간중합효소연쇄반응을 이용한 상대정량법으로 miR-29 family의 발현을 측정하였다. RNU6-2를 내부 지시자로 사용하였고, 혈액학적 지표들에 관한 정보는 의무기록에서 얻었으며, Janus kinase 2 (JAK2) V617F와 calreticulin 유전자변이는 각각 대립형질특이중합효소연쇄반응과 직접염기서열분석법으로 분석하였다. 진성적혈구증가증과 진성혈소판증가증에서 정상대조군에 비해 miR-29b 발현이 유의하게 감소되어 있었고, 일차골수섬유증에서는 miR-29 이상발현이 관찰되지 않았다. JAK2 V617F 변이를 가진 골수증식종양들이 변이를 가지지 않은 경우보다 miR-29a와 miR-29b 발현이 유의하게 낮았고, CALR 변이와의 상관성은 관찰되지 않았다. miR-29 는 골수섬유화가 증가할수록 높은 발현을 보였고, 백혈구 수, 헤모글로빈 수치, 혈소판 수와 연관성은 관찰되지 않았다. 진성적혈구증가증과 진성혈소판증가증에서 관찰된 miR-29b 이상발현은 다른 혈액종양에서와 같이 miR-29b가 암억제인자로 작용함을 시사하며, miR-29a와 miR-29b가 JAK2 V617F 변이와의 연관성을 보이는 것은 골수증식종양의 표현형이나 암발생 기전에서 JAK2 변이와 연관되어 영향을 줄 가능성을 시사한다. MiR-29와 골수 섬유화와의 관련성에 대해서는 더 많은 수의 검체를 대상으로 연구가 필요하다.

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