표제지

목차

국문 초록 7

제1장 예쁜꼬마선충을 이용한 신경독성물질 스크리닝 및 신경독성 기작 연구 9

Ⅰ. 서론 10

1. 환경유해인자인 농약의 위험성 10

2. 농약 노출과 질환 10

Ⅱ. 연구 목적과 필요성 12

Ⅲ. 실험 재료와 실험 방법 13

1. C. elegans strain and maintenance 13

2. Synchronization of developmental stages in C. elegans 13

3. Toxicants exposure to C. elegans 13

4. Phenotype observation and imaging 13

5. Neuronal morphological analysis 14

6. Statistical analysis 14

Ⅳ. 실험 결과 15

1. 예쁜꼬마선충의 도파민성 뉴런 리포터를 이용한 신경독성물질 스크리닝 15

2. 디티아논은 예쁜꼬마선충에서 산화스트레스와 미토콘드리아 결함을 증가시킴으로써 도파민성 뉴런 독성을 야기한다. 18

Ⅴ. 고찰 21

1. 시판 농약의 독성 효과 21

2. 물질 혼합에 의한 생체 내 효과 변화 21

3. 디티아논과 파킨슨병 21

4. 앞으로의 연구 방향성 22

제2장 플루디옥소닐에 의한 종합 독성 평가 23

Ⅰ. 서론 24

Ⅱ. 연구 목적과 필요성 25

Ⅲ. 실험 재료와 실험 방법 26

1. C. elegans strain and maintenance 26

2. Synchronization of developmental stages in C. elegans 26

3. Fludioxonil exposure to C. elegans 26

4. Phenotype observation and imaging 26

5. Survival assay 27

6. Measurement of worm length 27

7. Analysis of brood size 27

8. Neuronal morphological analysis 27

9. Basal slowing response(BSR) assay 28

10. Reactive oxygen species(ROS) detection assay 28

11. Mitochondrial morphological analysis 28

12. Thrashing assay 29

13. RT-qPCR 29

14. Statistical analysis 29

Ⅳ. 실험 결과 31

1. 플루디옥소닐은 예쁜꼬마선충의 생존율을 감소시킨다. 31

2. 플루디옥소닐은 예쁜꼬마선충의 성장을 저해한다. 33

3. 플루디옥소닐은 예쁜꼬마선충의 생식을 저해한다. 35

4. 플루디옥소닐은 예쁜꼬마선충의 도파민성 시스템을 비정상적으로 조절한다. 37

5. 플루디옥소닐은 활성산소종을 증가시킨다. 40

6. 플루디옥소닐은 미토콘드리아 절편화를 유도하지 않는다. 42

7. 플루디옥소닐은 예쁜꼬마선충에서 행동 장애를 유발한다. 44

Ⅴ. 고찰 46

1. 플루디옥소닐에 의한 광범위한 독성 46

2. 플루디옥소닐과 신경질환 46

3. 신경질환과 산화스트레스, 미토콘드리아의 관계성 47

참고문헌 49

영문 초록 54

부록 56

〈부록 1〉 Classification and chemical properties of pesticides used in this study 56

〈부록 2〉 Formulation and ingredients of pesticides used in this study 57

〈부록 3〉 List of chemicals used in this study 59

〈부록 4〉 List of kits used in this study 60

〈부록 5〉 List of primer used in RT-qPCR 61

Table 1. Screening of neurotoxic pesticides using dopaminergic neuronal reporter in C. elegans. 16

Figure 1. Screening of neurotoxic factor using dopaminergic neuronal reporter in C. elegans. 17

Figure 2. Dithianon induces dopaminergic neurotoxicity by increasing oxidative stress and mitochondrial dysfunction in C. elegans. 20

Figure 3. Fludioxonil reduces viability in C. elegans. 32

Figure 4. Fludioxonil disrupts growth of C. elegans. 34

Figure 5. Fludioxonil delays and decreases reproduction in C. elegans. 36

Figure 6. Fludioxonil dysregulates the dopaminergic system in C. elegans. 38

Figure 7. Fludioxonil increases reactive oxygen species. 41

Figure 8. Fludioxonil does not affect mitochondrial fragmentation. 43

Figure 9. Fludioxonil causes behavior disorders in C. elegans. 45

Figure 10. Fludioxonil causes multiple toxicity in C. elegans. 48