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논문명/저자명
The analysis of SUMOylated Nup184 involved in mRNA export / 채애리 인기도
발행사항
서울 : 성신여자대학교 대학원, 2012.2
청구기호
TM 570 -12-191
형태사항
43 p. ; 26 cm
자료실
전자자료
제어번호
KDMT1201242276
주기사항
학위논문(석사) -- 성신여자대학교 대학원, 생물학과, 2012.2. 지도교수: 윤진호
원문
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Title Page

Abstract

Contents

I. Introduction 10

II. Materials & Methods 15

II.1. Strains and culture conditions 15

II.1.1. Strains 15

II.1.2. Culture media 15

II.2. Plasmids 16

II.3. Enzymes 16

II.4. Reagents 20

II.5. Primers and DNA sequence analysis 20

II.6. Site-directed mutagenesis 20

II.7. Integration vector 21

II.8. Transformations 24

II.8.1. Transformation of E. coli 24

II.8.2. Transformation of S. pombe 24

II.9. Detection of protein 25

II.9.1. Preparation of protein (NP-40 based extraction method) 25

II.9.2. Immunoprecipitation 25

II.9.3. Western blot analysis 26

II.10. S. pombe genomic DNA isolation 26

II.11. Spot assay 27

II.12. In situ hybridization 27

III. Results 33

III.1. Constructions of the strains for experiments 33

III.1.1. Construction of pREP41X-pmt3GG plasmid 33

III.1.2. Construction of PUX2 strain by Random Spore Analysis(△pmt3::kanr nup184-gfp::ura4+ /41X-pmt3GG)(이미지참조) 34

III.2. Analysis of nup184 serial truncated mutants 35

III.2.1. Phenotype of nup184 serial truncated mutants 35

III.2.2. SUMO modification of nup184 serial truncated mutants 40

III.3. nup184 point mutants 44

III.3.1. Construction of nup184 point mutants 44

III.3.2. Analysis of phenotype of nup184 point mutants 46

IV. Discussion 49

References 53

국문초록 56

Table 1. Strains used in this study 17

Table 2. Plasmids used in this study 19

Table 3. Primers used in this study 22

Table 4. Composition of media for S. pombe 29

Table 5. Buffers 31

Figure 1. Schematic diagram of the PUX2 strain 35

Figure 2. Schematic diagram showing the nup184 serial truncatedconstructs 37

Figure 3. Expression of serial deleted Nup184p::GFP 38

Figure 4. Growth test for nup184 serial truncated constructs by spot assay 39

Figure 5. Interaction of Nup184 with Pmt3 42

Figure 6. Interaction of sequencial truncated Nup184 with Pmt3 43

Figure 7. Schematic diagram showing the nup184 point mutatedconstructs 45

Figure 8. Growth test for nup184 point mutants 47

Figure 9. Poly(A)+ localization in nup184 sequential truncated and pointmutant cells(이미지참조) 48

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분열 효모인 Schizosaccharomyces pombe의 nup184 유전자는 핵공 복합체의 구성요소인 핵공 단백질이다. 핵공 복합체는 단백질로 이루어진 거대 조립체로써 핵막을 통과하고 있어 핵과 세포 질 사이의 물질 이동에 관여한다. nup184 유전자는 균주의 생장에 필수 적이지는 않지만 이 유전자의 결실 돌연변이는 완전배지에서 낮은 생장률을 보이고 mRNA의 세포질 수송에 결함을 보인다. nup184의 서열에는 총 7개의 SUMO consensus 서열이 존재하는데 이 서열은 SUMO 단백질이 결합할 수 있다. nup184 내에 존재하는 SUMO consensus sequences는 다음과 같다; 728LKTD, 1055VKLD, 1091FKHE, 1212VKED, 1554LKIE. SUMO는 97개의 아미노산으로 이루어진 작은 단백질이고 유비퀴틴과 유사하다. SUMO는 S. pombe와 S. cerevisiae에서 각각 pmt3와 smt3에 의해 암호화 되어있다. 이 단백질은 번역후 변형 과정에 관여하는 단백질로써 목표 단백질의 라이신 잔기에 결합하여 그 기능을 조절한다. SUMO 변형은 (SUMOylation) 세포 내 기능을 조절하는데 이에는 전사, DNA 손상 반응, 세포 주기, 핵 수송 등이 포함 된다. 이 연구에서 우리는 Nup184 단백질 이 SUMOylation 되는지에 관한 연구, 만약 그렇다면, SUMOylation이 Nup184의 기능에 미치는 영향에 관한 연구 등을 진행할 것이다.

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