표제지
목차
ABSTRACT 9
제1장 서론 11
제1절 식중독 병원균의 전통적인 검출법과 한계점 11
제2절 PCR과 등온 핵산 증폭, LAMP 14
제3절 LFA를 이용한 표적 물질 분석 17
제4절 연구 목적 21
제2장 실험 재료 및 방법 22
제1절 실험재료 22
제2절 균주 배양 25
제3절 Direct boiling method 25
제4절 DNA extraction kit를 이용한 gDNA 추출 26
제5절 LAMP primer, Loop capture 및 Control capture 설계 26
제6절 DNA modified AuNPs 제작 28
1. AuNPs 제작 28
2. DNA modified AuNPs 제작 28
제7절 LFA strip 제작 29
제8절 LAMP-LFA를 이용한 Listeria monocytogenes 검출 31
1. LAMP 31
2. LFA 31
3. Real-time fluorescence analysis 32
4. Colorimetric analysis 32
5. Agarose gel electrophoresis 32
6. 검출 민감도 검사 33
7. 검출 특이도 검사 33
제9절 실제 식품 매트릭스에서의 검출 가능성 확인 34
1. 식품 매트릭스 전처리 및 균주 spiking 34
2. 식품 내 균주 회수 및 검출 35
제3장 결과 및 고찰 36
제1절 Listeria monocytogenes 검출 시스템 개략도 36
제2절 LAMP-LFA의 검출 가능성 38
제3절 LAMP-LFA의 최적화 41
1. LAMP primer 농도 최적화 41
2. Loop capture 및 Control capture의 최적 조합 선정 43
제4절 LAMP-LFA의 검출 민감도와 특이도 47
제5절 Practical application 51
제4장 결론 54
참고문헌 56
국문초록 63
Table 1. Oligonucleotide sequences used in the study 24
Table 2. In silico analysis using outer primers (F3 & B3) 27
Table 3. Possible combinations of Loop and Control captures 45
Figure 1. Traditional foodborne pathogen detection methods. (a) Culture-based microbiological detection methods. (b) Overview of... 13
Figure 2. Schematic representation of the LAMP process. 16
Figure 3. Overview of LFA format. 18
Figure 4. Classification of LFA format. (a) Sandwich format (b) Competitive format (c) NALF format (d) NALFIA format 20
Figure 5. Structure of the LFA strip showing the detailed dimension. 30
Figure 6. Schematic representation of detecting Listeria monocytogenes in real samples. In the LFA strip, the test spot is used to generate a colorimetric signal when the LAMP reaction occurs in the presence of target Listeria monocytogenes... 37
Figure 7. Feasibility of detection of the LAMP-LFA system. Result of (a) LFA, (b) Real-time fluorescence measurement, (c) Colorimetric analysis, (d)... 40
Figure 8. Optimization of LAMP primer concentrations. (a) Cycle number according to various concentrations of inner primers (IP). (b) Cycle number... 42
Figure 9. Results of optimizing the Loop capture and Control capture used for LFA. (i) NTC, (ii) positive control (Listeria monocytogenes gDNA 400 aM).... 46
Figure 10. Detection sensitivity of the LAMP-LFA system. Result of (a) LFA, (b) Real-time fluorescence analysis. (i) NTC, (ii) 10 CFU/mL, (iii) 10² CFU/mL,... 49
Figure 11. Detection specificity of the LAMP-LFA system. Result of (a) LFA, (b) Real-time fluorescence analysis. (i) NTC, (ii) Listeria monocytogenes, (iii)... 50
Figure 12. Result of spiking test using the LAMP-LFA system. (a) Listeria monocytogenes detection in cabbage. (b) Listeria monocytogenes detection... 53