동물세포배양기술은 치료용 단백질이나 항체 및 의약품의 생산들에 쓰이는 기술이다. 현재 바이오 의약품 시장에서 포유류 세포에서 생산되는 재조합 단백질 치료제에 대한 수요가 지속적으로 증가하고 있다. 그 중 Chinese hamster ovary (CHO) 세포가 치료용 단백질의 상업적인 생산을 위한 주요 세포로 이용되고 CHO 세포는 부유배양이 가능해 재조합 단백질의 대량 생산에 용이하며, 효율적인 유전자 증폭시스템과 고 발현 세포주 선별에 대한 기술이 잘 밝혀져 있다는 장점이 있기 때문이다. 세포주 개발에는 CHOpro3-로부터 DHFR 유전자가 모두 결손 된 CHO-DG44 (DHFR-/-) 세포주가 일반적으로 널리 사용되고 대신 되고 있는데 이러한 동물세포를 이용한 발현시스템에는 여러 가지 장점이 있지만 미생물에 비해 생산성이 낮다는 단점도 있다. 또한 세포에서 목적 단백질을 대량으로 생산하는 기술 개발은 세포 내 유전체, 전사체, 단백체, 대사체의 정 보를 기반으로 이루어져 왔다. 특히, 단백질 생산의 시작이라 할 수 있는 유전체 수준에서 목적유전자의 증폭 기술은 분해서열과 선별마커유전자의 코돈 비최적화가 전통적으로 사용되고 있다. 최근 바이오 의약품에 대한 높은 수요에 대응하기 위해서는 낮은 농도의 선택압으로 단기간에 고생산능 세포를 확보하는 것이 중요하다. 그러나 기존에 사용하는 유전자증폭시스템인 PEST 분해서열과 선별마커 유전자의 코돈 탈최적화는 생산성을 높이는데 높은 농도의 선택압과 오랜 시간이 걸린다는 문제점을 가지고 있다. 그리고 제작기간이 오래 걸리면 세포 유전체의 안정성이 감소하여 목적단백질의 생산성에 영향을 끼칠 수 있다. 이에, 본 연구에서는 세포에서 목적단백질 생산을 위한 새로운 증폭 시스템을 구축하고자 노력한 결과, 분해서열 Degron은 기존에 알려진 유전자증폭시스템과 비교하여 분해능이 높고 비교적 짧은 서열을 가지고 있어 목적단백질의 구조적인 문제를 야기할 가능성이 낮아 Degron 서열을 선택 마커 유전자에 융합하였다. 세포 형질감염은 목적단백질을 생산하는 세포를 전기침공법으로 생성 후 선별하는데 사용함으로써, 고생산능 세포주 개발을 통해 세포주개발 기술을 구축하고 세포주 개발에 있어서 효율적인 발현벡터를 사용하여 고생산능 세포주를 얻는 과정을 확립하고자 하였다. Degron의 여러 서열 중에서 분해강도가 상, 중, 하의 세기를 갖는 UbR, UbK, UbS를 각각 영양요구성마커 유전자 DHFR의 상위에 융합하여 목적단백질로 생산하는 인간전환성장인자(hTGF-β1)와 함께 발현하기 위해 IRESatt를 hTGF-β1 발현 카세트와 DHFR 발현 카세트 사이에 삽입하였다. 융합된 마커를 통해 형질감염한 세포주 중 가장 높게 발현되는 마커를 선택하였고 제한희석을 통해 Clone 선별과정을 진행하였다. 본 연구는 분해서열 Degron을 영양요구성마커 유전자의 상위에 융합하여 유전자 증폭기작을 통해 목적 단백질의 생산성을 포함하는 재조합 벡터 및 상기 재조합 벡터로 형질감염된 세포를 통한 생산량 분석을 통해 고생산성 세포주 개발 및 선별과정을 제공한다.