표제지
목차
국문초록 8
ABSTRACT 10
제1장 서론 12
1.1. Clostridiodies difficile의 병원성 12
1.2. 병원성 세균의 다항생제 저항성 조절자 단백질 12
1.3. C. difficile의 다항생제 저항성 조절자 중 HsmR 14
제2장 실험 방법 16
2.1. HsmR 단백질의 과발현 및 정제 16
2.2. HsmR 단백질과 DNA 복합체의 결정화 및 X-선 회절 17
2.3. 헴-결합 HsmR의 UV-VIS 분광 분석 18
2.4. HsmR-DNA 복합체의 전기영동 이동성 변화 분석 18
제3장 결과 및 논의 20
3.1. HsmR 단백질의 발현 및 정제와 결정화 20
3.2. HsmR 단백질과 DNA 복합체의 결정화 및 구조 24
3.3. 헴 활성자의 예측되는 HsmR 내 결합 부위 31
3.4. HsmR-DNA 복합체에서의 헴의 영향 및 향후 연구 방향 34
참고문헌 37
[표 1-1] Clostridioides difficile에 존재하는 14개의 MarR 단백질 정보 14
[표 3-1] HsmR-DNA 복합체 내 상호작용의 종류 27
[그림 1-1] HsmR의 유전자좌와 유전자간 영역 15
[그림 3-1] HsmR의 친화 크로마토그래피 용출물의 G-250 염색 결과 20
[그림 3-2] HsmR의 크기-배제 크로마토그래피 결과 21
[그림 3-3] HsmR의 정제 후 SDS-PAGE 결과 22
[그림 3-4] HsmR 단백질의 초기 결정화 모양 23
[그림 3-5] 트립신을 이용한 제한된 단백질 가수분해 방법 이후의 HsmR의 결정화 모양 23
[그림 3-6] 최종적으로 선별된 MarR이 결합할 것으로 예상되는 유사 회문 서열 구조의 DNA... 24
[그림 3-7] HsmR의 DNA 복합체 결정 모양 25
[그림 3-8] HsmR 단독 단백질의 X-선 결정의 구조 26
[그림 3-9] HsmR-DNA 복합체의 X-선 결정의 구조 26
[그림 3-10] HsmR과 DNA의 상호작용. (빨간색 박스: 회문 서열의 DNA 뉴클레오티드, 빨간색 화살표: 단백질 잔기와 DNA의 인산염... 27
[그림 3-11] HsmR 단독 단백질과 DNA 복합체에서의 67번 라이신과 93번 아르기닌의 배향 변화(녹색: HsmR 단독 단백질, 청록색:... 28
[그림 3-12] HsmR과 C. difficile의 나머지 13개 MarR 단백질의 DNA 상호작용 부위의 서열 정렬 및 비교(빨간색 굵은체: 라이신과... 29
[그림 3-13] HsmR과 5ERI(왼쪽 녹색), 3NQO(오른쪽 녹색)간 라이신과 아르기닌 잔기의 배향 비교 30
[그림 3-14] HsmR-DNA 복합체에서 DNA 소홈에 위치하고 있는 K⁺ 이온 30
[그림 3-15] 구조가 규명된 헴과 결합한 단백질의 예 (a) 1WOV;heme oxygenase-2 (Synechocystis sp.) (b) 4CDP;heme oxygenase ChuS... 32
[그림 3-16] 정상 HsmR과 4개 단일 돌연변이 HsmR의 헴에 대한 흡광도 33
[그림 3-17] HsmR-DNA 복합체에서 단일 돌연변이에 사용된 4개 잔기의 배향 변화... 34
[그림 3-18] 헴의 농도 기울기에 따른 HsmR-DNA 복합체의 전기영동 이동성 변화 결과 35