표제지
국문 요약
목차
서론 11
연구 방법 15
항체 및 시약 15
분자생물학 실험 15
세포 배양 실험 21
면역 블러팅 22
Streptactin 을 통한 EMC5 pulldown 23
ER-BioID 라벨링 23
펄스-체이스 실험 24
교차 연계자 처리 실험 25
당구배 실험 25
Bafilomycin-A1 및 MG132 처리 실험 26
연구 결과 27
EMC 결핍 세포주 제작 27
소포체 제한 비오틴 표지 모델 구축 27
EMC 표적 후보로서의 ARV1 28
EMC 매개 ARV1 올리고머 형성 30
EMC 매개 ARV1 리소좀 분해 경로 31
자가 포식기전에 의한 ARV1 분해 경로 32
고찰 66
참고 문헌 69
Abstract 74
표 1. Primer sequence 17
그림 1. EMC5 결핍 세포주 제작 34
그림 2. EMC 기능 상실 확인 35
그림 3. ER-BioID 모델 구축 36
그림 4. ER-BioID 모델 확인 (1) 37
그림 5. ER-BioID 모델 확인 (2) 38
그림 6. ER-BioID 모델을 통한 비오틴화 단백질 추출 39
그림 7. EMC 결핍 세포주 정량 질량 분석 40
그림 8. HA-TEV-ARV1 모식도 및 발현 41
그림 9. EMC5와 ARV1간의 직접적인 연결 확인 (1) 42
그림 10. EMC 결핍 세포에서의 ARV1 전사 비교 43
그림 11. EMC 결핍에 의한 ARV1 구조 분석 44
그림 12. 교차 연계자에 의한 ARV1 올리고머 형성 분석 45
그림 13. DSP의 DTT에 의한 가역반응 분석 46
그림 14. GFP-P2A-RFP-ARV1 모식도 및 발현 47
그림 15. GFP-P2A-RFP-ARV1 발현 위치 분석 48
그림 16. ARV1* 발현위치 분석 49
그림 17. ARV1* 발현위치 분석 (2) 50
그림 18. ARV1*의 가용성 확인 51
그림 19. ARV1*의 밀도 구배 분석 52
그림 20. EMC매개 ARV1 올리고머 형성 53
그림 21. △EMC5 특이적 EMC 구성 단백질 분해 확인 54
그림 22. EMC4, EMC5, EMC8 결핍 세포주에서의 ARV1 발현 비교 55
그림 23. 과발현 신호 세기에 따른 ARV1 발현 비교 분석 56
그림 24. Cycloheximide 처리 후 ARV1 변동 분석 57
그림 25. ARV1* 리소좀 분해기전 분석 58
그림 26. ARV1*의 프로테아좀 분해기전 분석 59
그림 27. EATR 모델 제작 60
그림 28. EBSS에 의한 ARV1 이동 양상 확인 61
그림 29. ATG7 결핍 세포주에서의 ARV1 발현 분석 62
그림 30. ATG7 결핍 세포주에서의 ARV1 분해 분석 63
그림 31. EMC5 결핍 세포주에서의 ARV1 발현 분석 64
그림 32. EMC의 ARV1 올리고머 선택적 자가 포식작용 기전 65