갈화는 칡(Pueraria lobata)의 꽃으로 한국이나 일본 및 중국 등 동아시아에 분포하고 자생하는 식물로 한방에서 과음으로 인한 두통, 발열, 갈증, 식욕부진, 복무팽만, 구토증 등 치료에 사용되어져 왔다. 본 연구에서는 갈화의 에탄올 농도별 추출물의 폴리페놀 함량과 항산화 활성을 평가하였고, 이들 간의 상관관계를 확인하였다. 또한 갈화 추출물에서 6개의 isoflavone 지표성분의 규명과 HPLC-DAD 동시분석 밸리데이션을 개발하여 유효성을 검증하였다.
갈화의 에탄올 농도별 추출물 중 60% 에탄올이 26.34%로 가장 높은 수율을 보였다. 총 폴리페놀 함량과 총 플라보노이드 함량은 각각 40% 에탄올 추출물, 열수추출물에서 가장 높았다. 전이 금속 이온의 환원력을 이용한 항산화 활성 PMA와 FRAP는 100% 에탄올 추출물, 열수추출물에서 각각 높았다. 자유 라디칼(DPPH·ABTS·NO) 소거 활성을 이용한 항산화 활성은 40% 에탄올 추출물이 우수했으며, HP 라디칼 소거 활성은 80% 에탄올 추출물이 우수하였다. 폴리페놀 중에서도 플라보노이드 함량과 FRAP의 상관계수 r = 0.866 (p〈0.01)로 가장 높은 유의적인 상관성을 보였다. 또한 전이 금속 이온의 환원력 PMA와 ABTS 자유 라디칼 소거 활성의 상관계수 r = 0.913 (p〈0.01) 으로 가장 높은 유의적인 상관관계를 보였다.
갈화에 함유되어 있는 주요성분에 대한 표준화를 위하여 HPLC-DAD 방법으로 지표성분들의 함량분석 및 동시분석 밸리데이션을 수행하였다. 분석법의 유효성을 검증하기 위해 직선성은 회귀방정식을 사용하여 검량선 R² 값이 0.9998 이상으로 나타났다. 6개의 지표성분들의 검출한계와 정량한계는 0.2720-0.7884 ㎍/mL, 0.8243-2.3890 ㎍/mL의 범위로 각각 측정되었다. 또한 실험실내 정밀성, 반복정밀성, 정확성 평가에서 상대표준편차(RSD) 값이 1% 이하로 확인하였으며, 24시간 내의 안정성은 함량 변화율이 2% 이내로 의약품 등 시험방법 밸리데이션 가이드라인의 기준치에 적합한 결과가 나타났다.
갈화 추출물 중 40% 에탄올 조건에서 폴리페놀 함량과 항산화 활성이 우수하여 천연 항산화제로써의 가능성을 확인하였으며, 갈화 지표성분의 동시분석 밸리데이션을 통해 천연 항산화제 연구의 기초자료로 제공하고자 한다.