표제지
목차
Abstract 10
1. 서론 12
2. 재료 및 방법 14
2.1. 배지 및 buffer 14
2.2. 균주의 분리 19
2.2.1. 해양 생물 시료의 채집 19
2.2.2. 해양 생물 유래 미생물 분리 21
2.3. 16S rRNA 유전자 염기서열 결정과 계통분류학적 분석 22
2.4. 속(Genus) 동정을 위한 Gram 양성균 시험 23
2.4.1. 형태적 특성 조사 25
2.4.2. 항산성 염색 26
2.4.3. 포자 염색 26
2.4.4. 운동성 시험 28
2.4.5. 호기 및 혐기성 생장 시험 28
2.4.6. Catalase 및 Oxidase 활성 시험 28
2.4.7. Glucose (산) 생성 시험 29
2.4.8. 산화-발효 시험 29
2.5. 생리생화학적 특성 30
2.5.1. 배지별 생장 30
2.5.2. 온도의 영향 30
2.5.3. 염도의 영향 30
2.5.4. pH의 영향 30
2.5.5. 고분자물질 분해 효소 활성 30
2.5.6. 탄소원 이용성 및 효소 활성 31
2.5.7. 항생제 내성 시험 32
3. 결과 및 고찰 34
3.1. 균주의 분리 34
3.2. 16S rRNA 유전자 염기서열 결정과 계통분류학적 분석 37
3.3. 속(Genus) 동정을 위한 Gram 양성균 시험 51
3.3.1. 형태적 특성 조사 51
3.3.2. 항산성 염색 52
3.3.3. 포자 염색 53
3.3.4. 운동성 시험 54
3.3.5. 호기 및 혐기성 생장 시험 55
3.3.6. Catalase 및 Oxidase 활성 시험 56
3.3.7. Glucose (산) 생성 시험 57
3.3.8. 산화-발효 시험 58
3.4. 생리생화학적 특성 59
3.4.1. 배지별 생장 59
3.4.2. 온도의 영향 60
3.4.3. 염도의 영향 62
3.4.4. pH의 영향 64
3.4.5. 고분자물질 분해 효소 활성 66
3.4.6. 탄소원 이용성 및 효소 활성 70
3.4.7. 항생제 내성 시험 76
4. 요약 77
5. 참고문헌 80
Appendix 88
Table 1. Chemical composition of media and buffer used in this study 15
Table 2. The first-stage for the identification of Gram-positive bacteria 24
Table 3. Evaluation of Oxidation-Fermentation (OF) test 29
Table 4. Mode of action of some major antibiotics used in this study 33
Table 5. Bacillus spp. form marine organisms 36
Table 6. Sequence similarity among Bacillus spp. from marine organisms based on 16S rRNA 38
Table 7. Cell shape and size based on Gram stain 51
Table 8. Acid-fast test 52
Table 9. Test for the formation of spore 53
Table 10. Motility test in different media 54
Table 11. Test for aerobic and anaerobic growth in two media 55
Table 12. Test for catalase and oxidase activities 56
Table 13. Test for acid production from glucose 57
Table 14. Test for oxidation and fermentation 58
Table 15. Growth test in different media 59
Table 16. Effect of temperature on cell growth 61
Table 17. Effect of salinity on cell growth 63
Table 18. Effect of pH on cell growth 65
Table 19. Enzyme activities for macromolecules 68
Table 20. Physiological and biochemical characterization by API kit (50 CHB/E) 72
Table 21. Physiological and biochemical characterization by API kit (20 E) 74
Table 22. Physiological and biochemical characterization by API kit (ZYM) 75
Table 23. Antibiotic Test 76
Table 24. Major phenotypic characteristics that differentiate Bacillus strains isolated in this study 79
Fig. 1. Sampling site. 20
Fig. 2. The life cycle of an endospore-forming bacterium 27
Fig. 3. Diversity of Bacillus spp. from marine organisms 39
Fig. 4. 16S rRNA-based phylogenetic tree of CBW2 40
Fig. 5. 16S rRNA-based phylogenetic tree of CBW3 41
Fig. 6. 16S rRNA-based phylogenetic tree of CBW4 42
Fig. 7. 16S rRNA-based phylogenetic tree of CBW9 43
Fig. 8. 16S rRNA-based phylogenetic tree of CBW14 44
Fig. 9. 16S rRNA-based phylogenetic tree of EBW4 45
Fig. 10. 16S rRNA-based phylogenetic tree of EBW10 46
Fig. 11. 16S rRNA-based phylogenetic tree of NWO 48
Fig. 12. 16S rRNA-based phylogenetic tree of SWA1 49
Fig. 13. 16S rRNA-based phylogenetic tree of SWA3 50
Fig. 14. Enzyme activity test for macromolecules such as DNA, cellulose, starch, casein and Tween. 69