표제지
감사의 글
국문요약
목차
I. 서론 15
II. 재료 및 방법 18
A. 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 생산 및 순수 정제 18
1. 재조합 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 DNA를 TOPIOF' 세포로 형질 변형 18
2. IPTG 예민성 클론 선별 18
3. 용해성 Fab 발현 및 periplasmic soluble extract의 분리 19
4. 용해성 Fab의 정제 19
5. SDS-PAGE 와 Immuno blotting 20
B. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 결합과 섭취에 미치는 인간 단클론 HSP60-45항체 Fab의 효과 분석 20
1. 세포 배양 20
2. 열충격 단백질-60의 형광 표지 21
3. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 결합 분석 22
4. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 결합에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 22
5. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 섭취 분석 22
6. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 섭취에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 23
7. 형광현미경을 이용한 HSP60-45 항체 Fab의 항원 특이적 억제 효과 23
C. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 pro-inflammatory cytokines 유도에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 24
1. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 TNF-α 생산 24
2. 대식세포에서 열충격 단백질-60에 의한 TNF-α 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45항체 Fab의 효과 분석 24
3. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 IL-6 생산 25
4. 대식세포에서의 열충격 단백질-60에 의한 IL-6 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 26
5. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 nitric oxide 생산 26
6. 대식세포에서의 열충격 단백질-60에 의한 nitric oxide 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 27
7. 열충격 단백질-60의 대식세포에서의 생물학적 활성이 endotoxin 오염의 영향인지의 확인 27
III. 결과 28
A. 인간 단클론 항-열충격 단백질60 항체 Fab의 분리 정제 및 확인 28
B. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 결합과 섭취에 미치는 인간 단클론 HSP60-45항체 Fab의 효과 분석 30
1. 대식 세포에서 열충격 단백질-60의 결합 분석 30
2. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 결합에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 30
3. 대식세포에서 열충격 단백질-60의 섭취 분석 31
4. 대식세포에서 열충격 단백질-60 섭취에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 31
5. 형광현미경을 이용한 HSP60-45 항체 Fab의 항원 특이적 섭취 억제 효과 37
C. 열충격 단백질-60에 의한 대식 세포에서의 pro-inflammatory cytokines 유도에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 40
1. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 TNF-α 생산 40
2. 대식세포에서 열충격 단백질-60에 의한 TNF-α 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45항체 Fab의 효과 분석 40
3. 열충격 단백질-60에 의한 대식 세포에서의 IL-6 생산 41
4. 대식세포에서의 열충격 단백질-60에 의한 IL-6 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 42
5. 열충격 단백질-60에 의한 대식세포에서의 nitric oxide생산 42
6. 대식세포의 열충격 단백질-60에 의한 nitric oxide 생산에 미치는 인간 단클론 HSP60-45 항체 Fab의 효과 분석 43
7. 열충격 단백질-60의 macrophages 에서의 생물학적 활성이 endotoxin 오염의 영향인지의 확인 43
IV. 고찰 53
V. 결론 55
참고문헌 56
ABSTRACT 61
Fig. 1. SDS-PAGE and immunoblotting of purified HSP60-45 Fab. 29
Fig. 2. Binding of FITC-labeled HSP60 to RAW264.7 macrophages in dose-dependent manner. 33
Fig. 3. Effect of anti-HSP60 Fab on binding of FITC-labeled HSP60 to RAW264.7 macrop hages. 34
Fig. 4. Uptake of FITC-labeled HSP60 into RAW264.7 macrophages in dose-dependent maruner. 35
Fig. 5. Effect of anti-HSP60 Fab on uptake of FITC-labeled HSP60 into RAW264.7 macrophages. 36
Fig. 6. Effect of anti-HSP60 Fab on uptake of rhodamine-labeled HSP60 into RAW264.7 cells. 39
Fig. 7. Production of TNF-α from human HSP60-stimulated RAW264.7. 46
Fig. 8. Effect of anti-HSP60 Fab on production of TNF-α from human HSP60-stimulated RAW264.7. 47
Fig. 9. Production of IL-6 from human HSP60-stimulated RAW264.7. 48
Fig. 10. Effect of anti-HSP60 Fab on production of IL-6 from human HSP60-stimulated RA W264.7. 49
Fig. 11. Production of nitric oxide from human HSP60-stimulated RA W264.7. 50
Fig. 12. Effect of anti-HSP60 Fab on production of nitric oxide from human HSP60-stimulated RAW264.7. 51
Fig. 13. Analysis of the possible involvement of contaminating LPS in TNF-α release induced by HSP60. 52