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요약문
SUMMARY
Contents
목차
제1장 연구개발과제의 개요 31
제2장 국내ㆍ외 기술개발 현황 37
제3장 연구개발수행 내용 및 결과 44
제1절 유전체 이용기술개발 44
제2절 단백체 이용기술개발 72
제3절 방사성동위원소 이용 치료기술 개발 95
제4절 PET 영상처리기술 개발 120
제5절 PET 영상이용 치료기술 개발 134
제6절 PET 영상 이용 진단기술 개발 139
제4장 연구개발 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 149
제5장 연구개발결과의 활용계획 154
제6장 연구개발과정에서 수집한 해외 과학기술정보 155
제7장 참고문헌 161
표 1. HPLC Gradient Condition 44
표 2. RT-PCR에 이용한 HSV1-tk 프라이머의 염기서열 58
표 3. Desalting column fractionation of Re-188 direct labeling antibody. 73
표 4. Stability of Re-188 antibody in PBS+ascorbic acid 73
표 5. Condition of Rituximab FITC conjugation 74
표 6. Radiolabeling efficiency Sm-153-3E8 antibody 74
표 7. Biodistribution of Re-188 3E8 antibody 77
표 8. Radiolabeling yeilds of IgG Lym-1 and ScFv Lym-1 with I-131 by Iodobead 82
표 9. 단회 방사면역치료 성적 97
표 10. 방사면역치료 임상시험 및 혈액학적 부작용 비교 97
표 11. 188Re(V)-DMSA(이미지참조)의 유기 층과 수용액 층에서의 Distribution과 단백질 결합능 110
표 12. PC-12 암 세포 이식 nude mouse에서의 188Re-meso-DMSA(이미지참조)의 생체 분포 111
표 13. PC-12 암 세포 이식 nude mouse에서의 188Re-dl-DMSA(이미지참조)의 생체 분포 112
표 14. PC-12 암세표 이식 nude mouse에서의 188Re(V)-DMSA(이미지참조)의 Organ에 대한 Tissue 비 113
표 15. Percenatge diameter of stenosis on retrograde urethrography after stent placement 114
표 16. Comparison of histologic findings in three groups 115
표 17. Statistical significance of histologic finding 115
표 18. Comparison of 15 Months PFS according to Clinical Stage and SS Group 143
표 19. Clinical Pathological data 145
표 20. Proteins involved in carbohydrate metabolism 145
그림목차= 25
그림 1. The HPLC Purification after the FIAU Iodination reaction. HPLC condition (uBondapak C18 10㎛ 125Å 7.8×300mm Prep Column(Waters); flow rate:2 mL/min) 45
그림 2. The HPLC Purification after the FIRU Iodination reaction. HPLC condition (uBondapak C18 10㎛ 125Å 7.8×300mm Prep Column(Waters):flow rate:2 mL/min) 45
그림 3. In vitro uptake of [125I]FIAU in MCA-TK cell fractions and MCA cells 46
그림 4. Gamma camera images obtains 4h after I.V. administration of [131I]FIAU to MCA and MCA-TK tumor-bearing mice 47
그림 5. HSV1-TK 유전자 클로닝 48
그림 6. HSV1-TK 발현 세표주의 I-131 FIAU 세포섭취율 평가 48
그림 7. pcDNA3.1/Hygro(+)+Luciferase vector 49
그림 8. E. coli DH5a(pcDNA3.1/Hygro(+)+Luciferase) transformant colony miniprep 50
그림 9. E. coli DH5a(pcDNA3.1/Hygro(+)+Luciferase) midiprep 50
그림 10. Luciferase 유전자의 IVIS image 51
그림 11. HSV1-TK 유전자의 감마카메라 영상 52
그림 12. HSV1-tk 발현 아데노바이러스 제작도 52
그림 13. HSV1-tk 특이 primer을 이용한 Ad-HSV1-tk 바이러스의 PCR 실험 결과 53
그림 14. Adenovirus에 의하여 LLC 세포에서 발현된 HSV1-TK 단백질의 western blot 54
그림 15. Ganciclovir 처리에 따른 LLC 세포, LLC-Ad-LacZ 세포, LLC-Ad-HSV1-tk 세포생존율. 54
그림 16. p53RE-HSV1tk의 구조 55
그림 17. U87 MG 세포에 p53RE-HSV1tk 벡터를 이입하고 adriamycin 처리 후 IVDU 섭취율 평가 56
그림 18. MCF7 세포에 p53RE-HSV1tk 벡터를 이입하고 adriamycin 처리 후 IVDU 섭취율 평가 56
그림 19. p53RE-HSV1tk가 안정적으로 이입된 세포에서 adriamycine 농도별의 처리에 따른HSV1-tk의 활성도 측정 57
그림 20. U87 MG와 MCF7 종양세포에서 adriamycine 농도별의 처리에 따른 p53 단백질 발현정도 확인 58
그림 21. p53RE-HSV1tk가 안정적으로 이입된 세포에서 adriamycine 농도별의 처리에 따른 HSV1-tk의 전사체 발현정도 확인 59
그림 22. p53RE-HSV1tk가 안정적으로 이입된 세포에서 adriamycin 농도별의 처리에 따른 HSV1-tk의 단백질 발현 확인 59
그림 23. MCA와 MCA-TK 세포주에서 125IVDU(이미지참조)의 섭취율 평가 60
그림 24. MCA와 MCA-TK 세포주에서 125IVFRU(이미지참조)의 섭취율 평가 60
그림 25. MCA 세포주에서 125IVDU(이미지참조)의 세포내 소기관내 섭취율 61
그림 26. MCA-TK 세포주에서 125IVDU(이미지참조)의 세포내 소기관내 섭취율 62
그림 27. MCA와 MCA-TK 세포주에서 125IVDU(이미지참조)의 DNA 합성 섭취율 62
그림 28. MCA와 MCA-TK 세포주에서 125IVDU(이미지참조)의 치료효과 63
그림 29. 125IVDU(이미지참조)를 미리 섭취한 MCA와 MCA-TK 복강 종양 모델에서 생존율 평가 63
그림 30. MCA와 MCA-TK 복강 종양 모델에서 125IVDU(이미지참조) 치료에 따른 생존율 평가 64
그림 31. Bcl-2 발현을 위한 expression vector 64
그림 32. Hela-Bcl-2 세포주와 MCA-7-Bcl2 세포주의 Bcl-2 발현 확인(western blot) 65
그림 33. Hela 세포주와 Bcl-2 유전자 발현 증가된 Hela 세포주에서 방사표지 Bcl-2 AS-ODN의 섭취율 65
그림 34. MCF-7 세포주와 Bcl-2 유전자 발현 감소된 MCF-7 세포주에서 방사표지 Bcl-2 AS-ODN의 섭취율 66
그림 35. TNF-alpha를 처리 농도에 따른 Bcl-2 발현 변화(RT-PCR) 66
그림 36. 감마선 처리 용량에 따른 Bcl-2 발현 변화(RT-PCR) 67
그림 37. CITC-DTPA 합성과정 75
그림 38. Gamma camera image of Re-188 antibody for days post injection. 78
그림 39. Gamma camera image after 42 hr incubation with Re-188 NAG3-3E8 antibody 78
그림 40. The maps of pCANTAB 5 E and E. coli pET-22b(+) shows the control regions and restriction enzyme site. 80
그림 41. Gene structure of recombinant scFv Lym-1 antibody. 80
그림 42. Optimal expression conditions by IPTG concentration and incubation time. (1 mM IPTG, 6hr, 37 ℃) 81
그림 43. Immunoreactivity of I-125 IgG lym-1 and ScFv lym-1 was confirmed with HLA-DR antigen expressed Raji cell line (A:I-125 IgG lym-1, B:I-125 scFv lym-1). 83
그림 44. Scatchard plot of I-125 IgG lym-1 and ScFv lym-1 was confirmed with HLA-DR antigen expressed Raji cell line (A:I-125 IgG lym-1, B:I-125 scFv lym-1). 84
그림 45. Flow cytometry analysis of IgG lym-1 (A) and ScFv lym-1 (B). Primary antibody (Anti - His taq mouse antibody) ; Secondary antibody (FITC conjugated - Anti - mouseIgG, Rabbit antibody) 85
그림 46. Biodistribution of I-125 IgG lym-1 (A) and I-125 ScFv lym-1 (B) in nomal Balb/c mice. 87
그림 47. Gamma camera image of I-131 IgG lym-1 antibodyin C57BR/cdJ SCID mice. 88
그림 48. Gamma camera image of I-131 scFv lym-1 antibodyin C57BR/cdJ SCID mice. 89
그림 49. Autoradiography of I-131 IgG lym-1 antibody in C57BR/cdJ SCID mice. 90
그림 50. Autoradiography of I-131 scFv lym-1 antibody in C57BR/cdJ SCID mice. 90
그림 51. Biodistribution of 153Sm labelde 3E8 antibody in LS174T tumor bearing mice After imaging work 92
그림 52. 감마카메라 영상 92
그림 53. Tc-99m 표지 DTPA-biocytin의 ITLC 방사크로마토그램 93
그림 54. Ho-166 표지 DTPA-biocytin의 ITLC 방사크로마토그램 94
그림 55. 3E8 항체의 다단계 표적화에 의한 생체분포 94
그림 56. 다단계 표적화에 의한 종양 대 혈액 비 (T/B)및 종양 대 근육(T/M) 비 95
그림 57. 다단계 표적화에 의한 대장암의 감마카메라 영상 95
그림 58. 방사면역치료 반복치료 예 96
그림 59. 전신과 골수의 흡수선량의 관계 99
그림 60. 투여방사능량과 흡수선량과의 관계 99
그림 61. 투여방사능량과 흡수선량과의 관계 100
그림 62. Diastereomeric DMSA의 합성도 101
그림 63. meso-DMSA-188Re 및 dl-DMSA-188Re의 합성도(이미지참조) 101
그림 64. 188Re(V)-meso-DMSA의 표지수율에 미치는 환원제인 sodium metabisulfate (Na₂S₂O5)의 농도변화 효과(이미지참조) 102
그림 65. 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 표지수율에 미치는 meso-DMSA의 농도변화 효과 102
그림 66. 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 표지수율에 미치는 pH 효과 103
그림 67. 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 TLC 라디오크로마토그램. 104
그림 68. 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 HPLC 라디오크로마토그램. 105
그림 69. 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 표지 수율에 미치는 sodium metabisulfate의 농도 변화 효과 106
그림 70. 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 표지수율에 미치는 dl-2,3-DMSA의 농도 변화 효과. 106
그림 71. 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 표지 수율에 미치는 pH 효과. 106
그림 72. 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 TLC 라디오크로마토그램. 107
그림 73. 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 HPLC 라디오크로마토그램. 108
그림 74. 188Re(V)-DMSA(이미지참조)의 체외 안정성. 109
그림 75. PC-12 암 세포 이식 nude mouse에서의 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 생체 분포 111
그림 76. PC-12 암세표 이식 nude mouse에서의 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 생체 분포. 112
그림 77. PC-12 암 세포 이식 nude mouse에서 188Re(V)-meso-DMSA(이미지참조)의 생체 영상. 113
그림 78. PC-12 암 세포 이식 nude mouse에서 188Re(V)-dl-DMSA(이미지참조)의 생체 영상. 114
그림 79. 188Re(이미지참조)을 이용한 풍선 확장술 치료 후 얻은 조직의 조직학적 소견 116
그림 80. Stent placement, balloon dilation and follow-up esophagography. 117
그림 81. Gross findings of representative pathology specimens six weeks after the procedure. 118
그림 82. Pathological comparisons of mid-stent areas of the three groups 118
그림 83. TUNEL assay data - topography of apoptotic cells in rabbit esophageal tissue (immunoperoxidase, x200). 119
그림 84. Images from patient 1. 119
그림 85. FHBG 제조를 위한 전구체인 N2-monomethoxytrityl-9-[4-(tosyl)-3-monomethoxy tri- tylmethylbutyl] guanine 합성 121
그림 86. [18F]FHBG(이미지참조) 표지 방법 121
그림 87. 18FHBG(이미지참조)의 세포 섭취율 122
그림 88. 124FIAU(이미지참조)의 세포 섭취율 122
그림 89. 18FHBG(이미지참조)의 GCV 치료전후 소동물 PET 영상 123
그림 90. 124FIAU(이미지참조)의 GCV 치료전후 소동물 PET 영상 123
그림 91. Thin Layer Chromatogram of 123I(이미지참조) Labeled Compound 125
그림 92. 리스트모드 파일 저장 형식 125
그림 93. 리스트모드 영상 획득 프로그램 예시 126
그림 94. 리스트모드 데이터를 사이노그램으로 재배열하는 프로그램의 예시 126
그림 95. Biodistribution of the radiolabeled drug following intravenous injection in rat 127
그림 96. Time-activity profiles of the radiolabeled drug in various organs following intravenous injection in rats 128
그림 97. Biodistribution of the radiolabeled drug following oral administration in rat 128
그림 98. Time-activity profiles of the radiolabeled drug in various organs following oral administration in rats 129
그림 99. 요인분석을 위해 얻은 rat의 심장부위의 동적 영상의 시간에 대한 변화. 130
그림 100. 연구에 이용된 요인분석의 개념 및 작업 흐름 131
그림 101. 요인분석으로 얻는 3개의 성분영상. 131
그림 102. 요인분석와 기존의 관심영역법으로 얻은 입력함수의 비교. 132
그림 103. 기존의 FDG섭취 영상(A)과 동적FDG영상과 요인분석으로부터 얻은 입력 함수를 이용하여 얻은 심근의 포도당대사능 매개변수 영상(B) 132
그림 104. PET/CT로 얻은 흉부위의 PET(A) 및 CT영상(B)과 이들 영상들의 융합영상(C). 133
그림 105. 적응형 임계치법을 이용하여 자동적인 추출하여 얻은 관심영역과 기존의 관심영역법의 비교. 134
그림 106. 뇌종양환자의 다양한 뇌영상 135
그림 107. 영상정합의 정확도 및 종양부피의 평가를 위해 설정한 관심영역. 136
그림 108. 정합영상의 3차원 표현을 위한 볼륨렌더링 136
그림 109. 호흡에 의한 영향 평가를 위한 모의실험 137
그림 110. 움직임 보정을 위해 구축한 환자 호흡 움직임 모니터링 장비와 PET/CT 137
그림 111. 종양 환자의 움직임 보정 영상 138
그림 112. 호흡의 변화가 큰 영상에서의 게이트된 영상 138
그림 113. 움직임을 분석하여 패턴에 따른 트리거 발생 장치 제작. 138
그림 114. 소동물 PET 영상 획득시 트리거 생성 장치를 이용하여 보정된 영상 139
그림 115. 임상병기 및 병소의 최대 SUV와 PET 영상의 합산점수(Summed Score)와 상관 141
그림 116. 임상병기 및 PET 소견의 합산점수에 따른 생존곡선 비교 143
그림 117. 방사면역치료 1주일째와 1개월째의 PET의 육안적지표와 대사부피(metabolic volume)을 이용한 치료 반응평가 ROC 곡선 분석 비교 144
그림 118. hepatoma의 면역염색 146
그림 119. cholangiocarcinoma의 면역염색 146
그림 120. Hexokinase II expression in human hepatoma cell lines 147
그림 121. Flow cytometry of hexokinase expression cell lines(Hep3B-051102-2,SNU-449-051102-3) 147
그림 122. Flow cytometry of hexokinase expression cell lines(HepG2-051102,SNU-475-051102-4) 148
원문구축 및 2018년 이후 자료는 524호에서 직접 열람하십시요.
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