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Title Page
Contents
요약 6
Introduction 10
Materials and methods 14
1. Ciliates and in vitro culture 14
2. Sequencing of mitochondrial cytochrome c oxidase 1 (cox1) gene 14
3. Serum scuticocidal activity 16
4. In vivo virulence 16
5. Secretory proteinase activity 17
6. Effect of E-64 on the resistance of M. avidus against serum scuti-cocidal activity 17
7. Sensitivity to drugs 18
8. Construction of long dsRNA producing vector 18
9. Expression of cysteine proteinase's long dsRNA in ΔalrΔrncΔasd E. tarda 19
10. Feeding of ciliates with auxotrophic Edwardsiella tarda(ΔalrΔrncΔasd E. tarda) 20
11. Feeding of ciliate with ΔalrΔrncΔasd E. tarda expressing long dsRNA 20
11.1. Ciliate growth 21
11.2. Quantitative RT-PCR 21
11.3. Secretory proteinase activity 22
Results 24
1. cox1 gene sequence and differences in resistance against serum killing activity 24
2. in vivo virulence 26
3. Secretory cysteine proteinase activity 28
4. Sensitivity to drugs 30
5. Expression of long dsRNA 32
6. Effect of feeding ciliates with ΔalrΔrncΔasd E. tarda expressing long dsRNA 34
6.1. Feeding ciliates with ΔalrΔrncΔasd E. tarda expressing GFP 34
6.2. Growth of ciliates 36
6.3. Quantitative RT-PCR 38
6.4. Secretory proteinase activity 40
Discussion 42
Abstract 45
Reference 49
Table 1. Summary of primers used in this study 23
1-1. For sequence of Miamiensis avidus cytochrome c oxidase 1 gene 23
1-2. For construction of plasmid 23
1-3. For quantitative RT-PCR 23
Figure 1. The serum scuticocidal activity of olive flounder against 3 isolates and compared... 25
Figure 2. Cumulative mortality of olive flounder (Paralichthys olivaceus) fingerlings by... 27
Figure 3. The difference of cysteine proteinase activity among 3 isolates. 29
Figure 4. In vitro killing activity of doxycycline, mebendazole, and bithionol against three... 31
Figure 5. Long dsRNAs produced in ΔalrΔrncΔasd E. tarda. 33
Figure 6. The fluorescence of M. avidus that ingest ΔalrΔrncΔasd E. tarda-GFP. The upper... 35
Figure 7. The number of ciliates counted for 3 days (every 24 hours) after ingesting each... 37
Figure 8. Relative quantification analysis of the expression of ciliate cysteine proteinase... 39
Figure 9. The secretory proteinase activity of each ciliate group. 41
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