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국문초록
목차
I. 서론 11
1. 연구 배경 11
1) Cervical cancer 11
2) Transforming growth factor-β stimulated clone-22(TSC-22) 15
3) Elk-1, member of ETS oncogene family 18
2. 연구 목적 22
II. 재료 및 방법 23
1. Cell line and cell culture 23
2. Plasmid constructs 23
3. Transient transfection 24
4. Cell growth assay 24
5. Terminal Transferase dUTP Nick End Labeling(TUNEL) assay 24
6. Western blot Analysis 25
1) Whole-cell extracts 25
2) Bradford protein assay 25
3) Western blot analysis 26
7. Immunocytochemistry(ICC) 27
8. Yeast two-hybrid assay 27
1) Plasmid constructs 28
2) Preparation of competent yeast cells 28
3) Transformation of bait plasmid 29
4) Transformation of prey plasmid 29
5) Growth assay and β-galactosidase assay 30
6) Subcloning of deletion constructs of TSC-22 and Elk-1 30
7) Transformation of bait and prey plasmid constructs 32
8) Co-transformation of deletion constructs 32
9) Growth assay and β-galactosidase assay(modified) 32
9. Co-Immunoprecipitation(co-IP) 33
10. Reporter gene assay 33
11. Quantitative real-time PCR(QRT-PCR) 34
1) Total RNA isolation 34
2) cDNA synthesis 34
3) QRT-PCR 35
12. Statistical Analysis 35
III. 결과 37
1. 자궁경부암에서 TSC-22의 발현저하 37
2. TSC-22에 의한 자궁경부암세포의 생존도 변화 39
3. TSC-22에 의한 자궁경부암세포의 세포사멸 유도 42
4. TSC-22와 Elk-1의 상호작용 확인 46
5. TSC-22와 Elk-1의 세포 내 발현 위치 확인 50
6. TSC-22와 Elk-1의 결합부위 분석 52
7. TSC-22가 Elk-1의 전사활성에 미치는 영향 54
8. TSC-22가 Elk-1 target gene의 발현에 미치는 영향 56
IV. 고찰 58
참고문헌 63
ABSTRACT 74
Table 1. List of high-risk and low-risk HPV types. 13
Table 2. Primer sequences for subcloning of TSC-22 and Elk-1. 31
Table 3. Human primer sequences for QRT-PCR. 36
Fig. 1. Pathogenesis of oncogenic HPV. 14
Fig. 2. Structure of TSC-22 protein. 17
Fig. 3. Schematic representation of Elk-1 protein. 21
Fig. 4. Down-regulation of TSC-22 in cervical cancer. 38
Fig. 5. Effects of TSC-22 on HeLa cell viability. 40
Fig. 6. Effects of TSC-22 on HT-3 cell viability. 41
Fig. 7. TSC-22 induced apoptosis in HeLa cells. 43
Fig. 8. TSC-22 induced apoptosis in HT-3 cells 44
Fig. 9. TSC-22 mediated apoptosis via cleaved PARP dependent pathway in HeLa cells. 45
Fig. 10. TSC-22 interacted with Elk-1. 48
Fig. 11. TSC-22 interacted with Elk-1 in vitro. 49
Fig. 12. Co-localization of TSC-22 with Elk-1 protein in HeLa cells. 51
Fig. 13. Mapping of the interaction region between TSC-22 and Elk-1 using yeast-two hybrid assay. 53
Fig. 14. TSC-22 repressing transcriptional activity of Elk-1. 55
Fig. 15. Effects of TSC-22 on expression of Elk-1 target genes in HeLa cells. 57
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