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표제지
목차
Abstract 9
총설 12
제1장. 제니스테인의 피부노화 개선 효과 23
I. 서론 23
II. 재료 및 방법 27
1. 실험 재료 27
2. 세포 배양 27
3. 세포의 SA-β-galactosidase 염색 28
4. 자외선 조사 28
5. 세포 증식률 29
6. Type I pN 콜라겐 합성량 측정 29
7. 콜라겐 매트릭스 내에서 type I pN 콜라겐 합성량 측정 30
8. MMP-1 합성 측정 30
9. 통계 처리 31
III. 결과 및 고찰 32
1. 제니스테인의 노화된 피부세포 활성화 32
2. 제니스테인의 type I pN 콜라겐 합성 (monolayer culture) 증진 효과 37
3. 제니스테인의 type I pN 콜라겐 합성 (collagen matrix culture) 증진 효과 44
4. 제니스테인이 MMP-1 합성에 미치는 영향 47
IV. 결론 51
제2장. 제니스테인의 피부미백 효과 55
I. 서론 55
II. 재료 및 방법 58
1. 실험 재료 58
2. Melan-a 세포를 이용한 melanin 생성 억제 효과 측정 58
3. Tyrosinase 활성 측정 59
4. In Situ tyrosinase 활성 측정 60
5. In vitro α-glucosidase 활성 측정 60
6. Endoglycosidase H 측정 60
7. Western blot analysis 62
8. Brown guinea pig을 이용한 미백 동물실험 63
8.1. 인공색소반 (artificial tanning spot)의 제작 63
8.2. 미백 물질의 도포 63
8.3. 미백 효능의 판정 63
8.3.1. 기기를 이용한 평가 63
8.3.2. 조직학적 평가 64
9. 통계 처리 64
III. 결과 및 고찰 65
1. 제니스테인의 melanin 생성 억제 효과 65
2. 제니스테인의 tyrosinase 활성 억제 효과 68
3. 제니스테인의 tyrosinase 발현에 미치는 영향 71
4. 제니스테인의 α-glucosidase 억제 효과 73
5. 제니스테인의 glycosylation 억제 효과 76
6. 제니스테인의 in vivo 미백 효과 79
IV. 결론 85
요약 89
참고 문헌 91
감사의 글 111
Table I-1. Classification of anti-aging ingredient used in cosmetics 15
Table I-2. Classification of depigmenting agents 20
Fig. I-1. The melanin synthetic pathway. 17
Fig. 1-1. The effect of genistein on cell proliferation in normal human dermal fibroblasts with age. 33
Fig. 1-2. Photographs of the effect of genistein on SA-β-galactosidase activity in 77 year aged normal human dermal fibroblasts. 35
Fig. 1-3. The effect of genistein on type I pN collagen synthesis in normal human dermal fibroblasts with age. 40
Fig. 1-4. The effect of genistein on type I pN collagen synthesis in normal human dermal fibroblasts with UVA irradiation and age. 43
Fig. 1-5. The effect of genisteln on type I pN collagen synthesis in collagen gel with sun-protected and sun-exposed skin derived normal human dermal fibroblasts. 46
Fig. 1-6. The effect of genistein on MMP-1 synthesis in normal human dermal fibroblasts with age. 50
Fig. 2-1. Inhibitory effect of genistein on cell viability and melanin synthesis in melan-a melanocytes (Relative melanin synthesis and viability value were expressed compared with control as 100%). 67
Fig. 2-2. The effect of genistein on tyrosinase activity. 70
Fig. 2-3. The effect of genistein on tyrosinase expression in melan-a melanocytes. 72
Fig. 2-4. Inhibitory effect of genistein on α-glucosidase activity. 75
Fig. 2-5. Inhibitory effect of genistein on the glycosylation of tyrosinase in melan-a melanocytes. 78
Fig. 2-6. The depigmenting effect of genistein on the UV-induced pigmenation in brown guinea pig. 82
Fig. 2-7. Photographs of the depigmenting effect of genistein. 83
Fig. 2-8. Histology of genistein treated skin. 84
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콩류에 다량으로 존재하는 제니스틴으로부터 얻을 수 있는 제니스테인이 노화된 피부 섬유아세포의 활성과 피부의 주성분인 콜라겐의 합성 및 이의 주요한 분해 효소인 MMP-1의 합성에 어떤 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. 또한 미백제로서의 응용 가능성을 알아보기 위해 melan-a 세포를 이용하여 멜라닌 생성에 미치는 영향과 멜라닌 생성 억제 효과가 tyrosinase의 활성이나 발현 혹은 그 외에 다른 기전에 의하여 나타나는 것인지 알아보았다. 제니스테인은 54세의 섬유아세포 증식을 유의하게 증가시켰으며, 이러한 세포 증식 효과는 비타민 A와 유사하게 자연노화가 많이 진행된 세포에서 뚜렷하였다. 아울러 77세의 섬유아세포에서 제니스테인 처리에 의해 세포노화의 지표인 SA-β-Gal 염색이 감소된 것을 확인하였다. 제니스테인은 섬유아세포에서 type I pN 콜라겐의 합성을 촉진하였고, UVA에 의해 콜라겐 합성이 매우 억제된 상황에서도 합성 증가 효과를 보였는데 이러한 현상은 자연노화가 많이 진행된 세포에서 더욱 효과적이었다. 콜라겐 매트릭스를 이용한 콜라겐 합성 측정 결과에서 제니스테인은 광노출부나 비노출 부위에서 얻은 모두의 세포에서 콜라겐 합성을 증가시킴을 알 수 있었으며, 이를 통해 제니스테인이 자연노화와 광노화에 모두 효과적인 것으로 추측할 수 있다. 제니스테인은 젊은 피부의 세포에서 MMP-1의 합성에는 큰 영향을 미치지 않았으나, 노화된 피부의 세포에서 매우 증가되어 있는 MMP-1의 합성을 억제하였다. 제니스테인이 멜라닌 생성에 미치는 영향을 알아보았다. Melan-a 세포에 제니스테인을 처리하고 멜라닌 양을 측정한 결과 멜라닌 생성이 농도 의존적으로 감소되었다. 멜라닌 생성 억제가 tyrosinase의 활성 저해와 관련되는지를 확인해보고자 하였다. 그 결과 제니스테인은 tyrosinase에 직접 작용하여 활성을 저해하지는 않았으나, 세포내의 tyrosinase의 활성은 농도 의존적으로 저해하였다. 제니스테인이 tyrosinase의 발현에는 영향을 미치지 않았는데 이는 세포내 tyrosinase의 활성 저해가 발현과는 다른 기전에 의해 일어난다는 것을 의미한다. 그리고 제니스테인은 α-glucosidase를 저해하였으며 이를 통해 N-linked glycoprotein인 tyrosinase의 glycosylation을 저해하여 tyrosinase의 세포내 이동이나 활성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다. 또한 제니스테인은 brown guinea pig에서 자외선에 의해 유도되는 피부흑화를 농도 의존적으로 개선하는 미백 효과가 있었다. 인공색소반에 제니스테인을 1%, 2% 도포한 결과 5주차에 대조군과 비교하여 유의적인 미백 효과를 확인할 수 있었다. 멜라닌에 대한 F-M 염색 결과를 살펴보면, 제니스테인 2%를 도포한 부위의 멜라닌 함량이 대조군 도포 부위에 비해 상당히 감소하였음을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서 제니스테인은 피부노화 개선과 미백제로서 유용하게 활용할 가치가 있는 것으로 사료된다.
원문구축 및 2018년 이후 자료는 524호에서 직접 열람하십시요.
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