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Contents
(Abstract) 5
Introduction 7
Materials and methods 9
Construction of plasmids 9
Bacteria strains and growth conditions 10
Preparation of rabbit anti-ClyA and anti-S1E antisera 10
Western blot analysis 11
Fluorescence microscopy 11
Hemolytic activity assay 11
Cytotoxicity assays using HeLa cells 12
Immunization 12
Results 14
Stable maintenance of vectors carrying asd gene without selection pressure 14
Expression of ClyA-S1E in S. typhimurium 14
Surface expression of ClyA-S1E protein on Salmonella typhimurium 15
Hemolytic activity analysis by ClyA-S1E on the blood agar plate 15
Cytotoxicity of S. typhimurium expressing ClyA-S1E against Hela cells 16
Production of anti-S1E antibody in mice immunized by S. typhimurium expressing ClyA-S1E 16
Discussion 18
References 19
(국문초록) 30
감사의 글 32
Table 1. Bacterial strains and plasmids used in this study 22
Fig. 1. Construction of plasmids. 23
Fig. 2. The effect of asd gene for bacteria growth in asd-mutated E. coli HJ1019. 24
Fig. 3. Expression of the protein ClyA and ClyA-S1E in S.typhimurium SHJ 2037. 25
Fig. 4. Surface expression of ClyA and ClyA-S1E on S.typhimurium SHJ2037. 26
Fig. 5. Hemolysis assay of S. typhimurium strains expressing the ClyA and ClyA-S1E proteins. 27
Fig. 6. The cytotoxicity of S. typhimurium expressing ClyA and ClyA-S1E against mammalian cells. 28
Fig. 7. Production of anti-S1E antibody in mice immunized by S. typhimurium expressing ClyA-S1E. 29
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