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Contents
Abstract 5
Introduction 7
Materials and methods 9
Strains, plasmids and sera 9
Construction of bacterial expression vector 9
Expression of capsid protein 11
Purification of capsid protein expressed by E. coli 12
ELISA for IgG titration 12
Surface plasmon resonance (SPR) assay 13
Results 16
Construction of bacterial expression vector 16
Small-scale expression and time course studies 16
ELISA and surface plasmon resonance 17
Discussion 25
References 27
초록 31
Table 1. Sequence comparison of the capsid protein genes of Korean porcine circovirus type 2 isolates 15
Table 2. Comparison of the amino acid sequence of porcine circovirus type 2 (PCV2) capsid protein encoding the gene sequences between Korean isolates 19
Fig. 1. SDS-PAGE analysis of recombinant capsid protein produced by E. coli. Lane 1; 10 L aliquot of the culture lysate of un-transformed BL21(DE3) pLysS, lane 2: BL21(DE3) pLysS(pRSET-circo-cap) before... 20
Fig. 2. Western blot analysis of the cross-reactivity of the expressed recombinant PCV2 capsid protein. Samples were reacted with pig serum (1:500) with PCV2 infection confirmed by PCV2-specific PCR... 21
Fig. 3. The changes in the surface plasmon resonance angle shift by binding between the Ag immobilized Prolinker B and various concentrations of Antibodies (anti-PCV2 ORF2 monoclonal). 22
Fig. 4. Sensorgrams showing the immobilization of antigen (150 ng/ml) and subsequent immunoassay of the serum sample (no.5, ×100, thin line) and 0.1 ㎎/ml BSA (thick line).... 23
Fig. 5. Correlation between the antibody titers of PCV 2 in the swine sera determined by ELISA and signals determined by surface plasmon resonance (Pearson correlation coefficient n=70, r= 0.877, p＜ 0.01). 24
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