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보고서 요약서
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Summary
목차
제1장 연구 개발 과제의 개요 7
제1절 연구 개발 목적 7
제2절 연구 개발의 필요성 8
제3절 연구 개발 범위 9
(1) 국내 연구 현황 9
(2) 국외 연구 현황 9
(3) 국내외 연구현황 비교 및 필요 연구 분야 10
제2장 연구 수행 내용 및 결과 12
형질전환 닭의 안정적 외래유전자 발현 검증 12
형질전환 닭 정액 동결 시스템 구축 12
닭 배아 섬유아세포 증식에 영향을 미치는 유전자 확인 12
pWAP 형질전환 생쥐의 genome상에 외래유전자 pWAP 유전자의 삽입 위치 조사 15
닭 세포의 보존을 위한 기전 연구 17
NUP37 17
PRDX3 20
HIBADH 23
2D-PAGE 분석법을 이용한 닭의 GRP78단백질과 연관된 단백질 분석 25
닭 줄기세포의 보존 효율 검증 25
형질전환 닭의 근친 교배 및 계획 교배를 통한 형질전환 닭 계통 조성 26
닭에서 3D8 scFv 단백질의 항바이러스 효과 검증 26
3D8 단백질 병아리 식이 실험 27
동물 장 관계에서 3D8 재조합 단백질을 발현하는 미생물의 생존능 시험 27
형질전환 닭에서 3D8 scFv 발현 분석 32
닭에서 신규 분리 동정한 닭 락토바실러스 기능 검증 32
형질전환 닭의 근친 교배 및 계획 교배를 통한 형질전환 닭 계통 조성 33
정액 동결 시스템을 이용한 형질전환 닭 계통 보존 34
닭의 세포 증식 및 세포사멸 억제 기전 분석 35
형질전환 닭의 유전자 안정적 발현 검증 37
줄기세포를 이용한 형질전환 닭 보존 기법 개발 40
닭 세포 증식관련 기전 연구 41
동결 보존된 형질전환 닭 정액의 기능 검증 51
줄기세포를 이용한 형질전환 닭 복원 가능성 검증 52
기 개발된 형질전환 돼지의 생리 및 번식특성 분석 52
tPA 형질전환 돼지의 혈중 세포 분석 56
htPA 형질전환 돼지의 장기 조직 내 도입 유전자 발현 분석 58
htPA 형질전환 돼지의 장기별 1차 세포 배양에 이은 도입 유전자 발현 분석 61
htPA 형질전환 돼지의 장기별 1차 세포 배양에 이은 세포 생존능 분석 63
형질전환 동물에 대한 외래 유전자 유무 및 안정성 분석 64
기 개발된 형질전환 돼지의 생리 및 번식특성 분석 67
형질전환 돼지 외래유전자 삽입위치 및 복제수 분석 70
조직 내 외래 유전자 전사수준 발현유무 분석 70
항바이러스 형질전환 돼지를 이용한 바이러스 저항성 분석 72
형질전환유래 유용산물에 대한 이화학적 분석 74
형질전환 돼지 개체별 정액 동결 보존 75
재조합단백질의 형질전환 동물 번식생리 영향 조사 79
형질전환축 번식생리 조사, 생식세포 보존 및 선발 82
3D8 돼지의 항바이러스 활성 검증 83
3D8 scFv 단일항체 생산 88
1차 및 2차 Boosting 후 혈청 ELISA 분석(3D8 scFv) 88
바이오장기용 형질전환 돼지의 증식 92
GalT KO 돼지 93
GalT KO+MCP 돼지 93
CD73 돼지 93
GalT⁻/⁻형질전환 돼지의 증식 및 계통조성 94
GalT⁻MCP/⁻MCP 형질전환 돼지의 증식 및 계통조성 96
GalT⁻MCP/⁻MCP /CD73 돼지 생산 및 증식 99
GalT⁻/⁻/MCP/TBM 돼지 생산 및 증식 101
바이오장기용 형질전환 돼지의 장기 크기 분석 102
정자의 수정 능력 분석 106
바이오장기용 형질전환 돼지 체세포 대량 배양 및 동결 보존 109
GalT⁻MCP/⁻MCP 형질전환 돼지의 특성 분석 110
정자 특성 분석 114
바이오장기용 형질전환 돼지의 정액 동결 115
GalT⁻MCP/⁻MCP/CD73 형질전환 돼지의 특성 분석 117
GalT KO 돼지의 연령별·개체별·조직별 세포 및 조직 구축 118
RT² PCR array를 위한 MGH 돼지의 샘플 및 유전자형 분석 118
면역 형광염색을 통한 alpha Gal 침묵 및 사람 CD 46 발현 확인 119
알파갈 돼지(GalT KO+MCP)의 생장 곡선 확인 120
알파갈 돼지(GalT KO+MCP)의 Oct4 유전자 전체에서 CpG island 분석 방법 확립 120
형질전환 돼지유래 세포 배양 및 핵산들의 추출 보존 121
MGH 돼지의 형질전환돼지(GalT KO+MCP)의 RT² PCR array 122
유전적 변형이 없는 Yucatan miniature 돼지의 RT² PCR array 126
형질전환 돼지의 줄기세포능력 분석을 위한 샘플 준비 128
GalT KO 돼지에서 노화 및 생리기능 관련 유전자의 지속적인 분석 128
형질전환 돼지 샘플 확보 129
유세포 분석기를 통한 형질전환 돼지에서 alpha Gal 발현 129
면역 형광염색을 통한 alpha Gal-epitope 발현 130
GalT KO 돼지세포에서 메틸화와 아세틸화의 분석 131
GalT KO 돼지 세포에서 메틸화 억제 약물 처리에 따른 CpG island의 변화 131
GalT KO 기반의 복합 형질전환(GalTKO/MCP/CD73) 돼지 세포주 구축 132
PCR 기반의 사람 텔로미어 길이 분석 방법 확립 134
PCR 기반의 돼지 최적 텔로미어 길이 분석 방법 확립 135
GalT KO 돼지의 Telomerase activity확인 136
제3장 목표달성도 및 관련분야 기여도 137
제1절 목표대비 달성도 137
제2절 정량적 성과(논문게재, 특허출원, 기타)를 기술 139
제4장 연구 결과의 활용 계획 140
제5장 연구 개발 결과의 보안 등급 141
제6장 연구시설·장비종합정보시스템에 등록한 연구시설·장비 현황 142
제7장 연구개발과제의 대표적 연구실적 143
제8장 기타사항 145
제9장 참고문헌 149