표제지
목차
01. 보건복지부 소관 유전자변형생물체(LMO) 위해성평가ㆍ심사 안내 4
1. 보건복지부 소관 LMO의 위해성평가ㆍ심사 5
가. LMO 개발ㆍ실험 5
나. 보건의료용 LMO 8
다. 타 부처 소관 LMO 10
2. 보건복지부 위해성평가 및 심사 안내 11
02. 위해성심사 신청자를 위한 안내 15
1. LMO 개발ㆍ실험 승인 신청서 작성 16
2. 보건의료용 LMO 위해성 평가자료 18
가. 인체위해성 평가자료 18
나. 환경위해성 평가자료 19
03. 위해성심사자를 위한 안내 25
1. LMO 개발ㆍ실험 승인 위해성심사 26
2. 보건의료용 LMO 위해성심사 29
가. 직접적인 위해성 32
나. 간접적인 위해성 33
3. 타 부처 소관 LMO 인체위해성 협의심사 36
가. 인체위해성 협의심사 36
나. 인체위해성 평가항목 검토방향 38
[참고 1] LMO 개발ㆍ실험 승인신청을 위한 위해성평가자료(작성 예시) 43
1. 유전자변형생물체의 용도에 관한 자료 43
가. 개발ㆍ실험의 배경 및 목적 43
나. 주요 용도 44
다. 사용이 승인된 국가 및 승인 용도 45
2. 유전자변형생물체에 관한 자료 46
가. 명칭 46
나. 도입유전자에 의하여 부여된 특성 47
다. 숙주 또는 근연종과의 생물학적 특성의 차이점 47
라. 병원성, 독소 생산성, 알레르기 유발성 및 기타 유해 생리활성물질 생산가능성 48
마. 유전자변형생물체 내 도입유전자의 위치 및 복제수 49
바. 유전자변형에 사용된 벡터의 특성 및 존재여부 50
사. 유전자변형생물체 및 도입유전자의 검출 및 확인방법 51
3. 숙주에 관한 자료 54
가. 명칭, 유래 및 분류학적 특성 54
나. 개발ㆍ실험하고자 하는 유전자변형생물체와 유사한 용도의 유전자변형생물체의 숙주로 이용된 사례 55
다. 숙주 및 근연종에서의 독소 생산성, 알레르기 유발성 및 기타 유해 생리활성물질 생산성 여부 56
라. 미생물인 경우, 병원성 존재 여부 및 알려진 병원체와의 관련성 56
4. 공여체에 관한 자료 57
가. 명칭, 유래 및 분류학적 특성 57
나. 개발ㆍ실험하고자 하는 유전자변형생물체와 유사한 용도의 유전자변형생물체의 공여체로 이용된 사례 58
다. 공여체 및 근연종에서의 독소생산성, 알레르기 유발성 및 기타 유해 생리활성물질 생산성 여부 58
라. 미생물인 경우, 병원성 존재 여부 및 알려진 병원체와의 관련성 59
5. 유전자재조합 특성에 관한 자료 60
가. 유전자변형에 사용된 현대생명공학기술 상세 실험방법 60
나. 벡터에 관한 자료 61
다. 도입유전자에 관한 자료 64
6. 안전관리에 관한 자료 75
가. 신청과제에 대한 기관 생물안전위원회의 생물안전심사 결과자료 75
나. 유전자변형생물체 취급ㆍ보관 안전관리에 관한 자료 75
다. 유전자변형미생물의 동ㆍ식물 접종에 관한 자료(해당되는 경우) 81
[별표 9-7] 개발ㆍ실험의 위해성 평가자료의 제출범위 85
[참고 2] 보건의료용 LMO 위해성심사 신청을 위한 평가자료(작성 예시) 88
1. 개발의 목적 및 용도에 관한 자료 88
가. 개발의 목적 88
나. 개발의 유용성 및 용도 88
2. 숙주생물체 및 3. 공여생물체에 관한 자료 90
가. 분류학상 위치(학명, 일반명, 품종ㆍ계통명 등을 포함) 90
나. 자연생태계 또는 해양생태계에 있어서 분포 상황 90
다. 인류에 의한 이용 내력 91
라. 생물학적 특성(자연환경 또는 해양수산환경과 이를 반영하는 시험 조건하의 생존 및 생식ㆍ번식 능력) 92
마. 유해물질의 생산 가능성(근연종의 유해물질 생산가능성 포함) 95
바. 숙주 및 근연종에서의 독소 생산성 및 알레르기 유발성 보고 자료 95
사. 병원성 및 외래인자(바이러스 등)의 오염여부 96
아. 기생성 등 기타 주요한 생리학적 성질 96
자. 야생형화 가능성 97
4. 유전자변형특성에 관한 자료(운반체(vector)에 관한 자료) 98
가. 명칭 및 유래 98
나. DNA 분자량 및 운반체 구성요소 정보, 제한효소에 의한 절단지도 98
다. 유해 염기서열 등의 유무 99
라. 벡터가 다른 세포로 전달될 가능성 또는 숙주 의존성 100
마. 운반체 대량발현을 위한 중간 숙주 이용 시 중간숙주 내 유전요소의 확인 및 기능 100
바. 필요 시, 중간숙주의 독소생산성, 알레르기성, 병원성 보고자료 101
5. 유전자변형특성에 관한 자료(도입유전자에 관한 자료) 102
가. 도입된 유전자의 분자량, 기능 및 특성 102
나. 도입 유전자의 구성요소에 관한 정보(유래, 기능, 크기, 염기서열 등) 102
다. 위해염기서열의 존재 유무 104
라. 완성된 벡터 내에서의 도입유전자 염기서열 위치 및 방향성 105
마. 외래전사해독 프레임의 유무와 그 전사 및 발현 가능성 106
6. 유전자변형생물체의 개발에 관한 자료 107
가. 유전자변형방법(배양, 재배, 육종 등 형질전환 방법) 107
나. 유전자변형생물체의 개발 과정에 대한 설명(번식, 배양, 육종법 등) 108
7. 유전자변형생물체의 특성에 관한 자료 110
가. 유전자변형생물체 내 도입유전자에 관한 자료 110
나. 도입유전자 발현산물에 관한 자료 114
8. 유전자변형생물체와 비변형생물체의 비교자료 119
가. 변형 후의 개선된 특성 및 성질 119
나. 숙주와 유전자변형생물체의 생존 및 증식 및 불활성화 방법의 차이 비교 119
다. 숙주 또는 숙주가 속하는 생물종과의 차이점 120
9. 세부 위해 영향 자료 123
가. 유독 물질의 생성과 관련된 정보(생물체가 분비하는 독성 물질의 여부 등) 123
나. 주변 생물 및 생태계에 미칠 수 있는 영향에 관한 정보 124
다. 야생형화 가능성 관련 정보 125
라. 유전자변형생물체를 도입하고자 하는 환경에 대한 정보 126
마. 유전자변형생물체의 독성에 관한 자료 127
바. 유전자변형생물체의 알레르기성에 관한 자료 128
10. 유전자변형생물체의 환경방출ㆍ모니터링ㆍ폐기에 관한 자료 130
가. 원형상태의 식용ㆍ사료용ㆍ가공용 유전자변형생물체의 경우(해당 유전자 변형 생물체 생산국 자료) 130
나. 번식용(배양용) 유전자변형생물체에 해당하는 경우 133
11. 해외 인가 및 이용 상황 137
12. 표준품제출 138
[별표 10-1] 유전자변형생물체의 위해성평가자료 139
[참고 3] 타 부처 소관 LMO 인체위해성 협의심사자료(작성 예시) 150
1. 유전자변형생물체 개발의 목적 및 용도에 관한 평가 150
2. 숙주 및 공여생물체에 대한 평가 151
가. 분류학상 위치(학명, 일반명, 품종ㆍ계통명 등을 포함) 151
나. 자연계 분포사항, 재배 및 품종개량 역사 151
다. 인류에 의한 이용 내역(안전하게 이용된 경험) 152
라. 숙주(공여체) 및 근연종에서의 독소 생산성 및 알레르기 유발성 보고자료 152
마. 미생물인 경우, 병원성 존재 여부 또는 알려진 병원체와의 연관성 조사자료 153
3. 벡터(운반체)에 관한 평가 154
가. 명칭 및 유래 154
나. DNA 분자량 및 제한효소에 의한 절단지도 155
다. 유해 염기서열 등의 유무 156
라. 벡터가 다른 세포로 전달될 가능성 또는 숙주 의존성 157
마. 중간 숙주 내 유전요소 확인 및 기능 157
바. 중간숙주에 대한 자료 158
4. 도입유전자에 관한 평가 159
가. 명칭 및 유래 159
나. 도입 유전자의 구성요소별 유래 및 염기서열 159
다. 이용을 위하여 유전자를 변형한 내용 159
라. 위해염기서열의 존재 160
마. 완성된 벡터내의 유전자염기서열 위치 및 방향성 160
바. 외래전사해독프레임의 유무와 그 전사 및 발현 가능성 160
5. 유전자변형생물체의 개발 방법에 관한 평가 161
6. 유전자변형생물체의 분자생물학적 특성에 관한 평가 162
가. 유전자변형생물체의 도입유전자 확인 결과 162
나. 유전자의 도입 위치 및 주변염기서열 분석 162
다. 도입 유전자의 복제수 163
라. 도입유전자의 검출 및 발현의 확인에 사용된 방법 163
마. 안정성에 대한 자료 164
바. 유전자변형생물체 게놈에 도입된 유전자가 독소, 알레르겐을 암호화하지 않음을 증명하는 자료 164
사. 유전자산물에 관한 자료 165
7. 유전자변형생물체와 비변형생물체의 비교 평가 167
8. 세부 위해 영향 평가 168
가. 유전자변형생물체의 병원성 평가 168
나. 유전자변형생물체의 독성 평가 168
다. 유전자변형생물체의 알레르기성 평가 170
9. 해외 인가 및 이용 현황 172
[참고 4] 유전자변형 모기 환경방출 위해성평가 결과(사례 보고서) 173
개요서(Executive summary) 173
서론 176
Part A. OX513A의 특성화 180
1. 수용생물체 정보 : 이집트 숲모기(Aedes aegypti) 180
2. 공여체 및 도입유전요소의 일반적인 설명 181
3. OX513A의 형질전환에 이용된 플라스미드 183
4. rDNA 도입 및 재조합 특성화 184
5. OX513A의 향상된 특성 189
6. OX513A의 탐지 및 확인 196
7. OX513A의 규제된 환경방출 197
Part B. 사바 섬에 OX153A의 의도적 이용(intended use) 199
1. 제출된 방출계획 세부사항 199
2. 수용환경 208
Part C. OX513A의 환경위해성평가 212
개론 212
1. 환경위해성평가의 접근법 212
2. 관심영역 215
3. 총체적인 위해성평가 및 결론 246
References 249
판권기 250
[참고 1] LMO 개발ㆍ실험 승인신청을 위한 위해성평가자료(작성 예시) 46
[표 1] 개발예정 LMO 46
[표 2] 벡터 내 각 구성 요소의 크기 및 구성요소의 origin 62
[표 3] 연구자 인력정보 80
[참고 2] 보건의료용 LMO 위해성심사 신청을 위한 평가자료(작성예시) 106
[표 1] 도입유전자 inverse PCR 염기서열 106
[표 2] LM모기 및 기존 종 모기의 성비 분리비율 실험결과 119
[표 3] LM모기 및 기존 종 모기의 성비 분리비율 실험결과 120
[표 4] 모기의 종간 교잡 실험결과 121
[표 5] 유전자변형 모기 AAA의 해외인가 상황 137
[참고 1] LMO 개발ㆍ실험 승인신청을 위한 위해성평가자료(작성 예시) 52
[그림 1] F. tularensis LVS 및 F. tularensis LVS-GFP의 colony 모습 52
[그림 2] 면역조직형광염색을 통해 관찰된 F. tularensis LVS-GFP 52
[그림 3] pKK214-GFP-Lux 벡터 지도 61
[참고 2] 보건의료용 LMO 위해성심사 신청을 위한 평가자료(작성예시) 89
[그림 1] Aedes aegypt와 뎅기열병과의 관계 89
[그림 2] Aedes aegypti 및 Aedes albopictus 분포상황 91
[그림 3] 모기의 생활사 93
[그림 4] 국내환경에서 모기의 확산가능성 시뮬레이션 결과 94
[그림 5] Aedes aegypt의 생활사와 GM모기의 생식호환 (A) 일반 모기의 생활사 (B) GM모기의 방제기능 (C) GM모기 생산체계 97
[그림 6] PhiC31 plasmid 지도 98
[그림 7] 도입유전자 지도 및 유전체 삽입위치 99
[그림 8] pTAR-ParA 및 pMC101-ParA plasmid 벡터의 염기서열 100
[그림 9] 유전자변형모기 AAA 도입유전자 종류 103
[그림 10] 유전자변형 모기의 삽입유전체에 대한 Bioinformatics 결과 104
[그림 11] 유전자변형모기 AAA 제작을 위한 Plasmid 제작체계 105
[그림 12] 유전자변형 모기 개발체계. Left : Framework, Right : Development 107
[그림 13] 유전자변형 장구벌레 성별 구별기준 108
[그림 14] 유전자변형 모기 육종시스템 109
[그림 15] 유전자변형 모기 도입유전자 확인결과 110
[그림 16] 도입유전자 사본수 판단을 위한 Southern blot 결과 111
[그림 17] 유전자변형 모기에서의 gfp 발현 확인결과 112
[그림 18] 유전자변형 모기의 도입유전자 지도 및 기능 114
[그림 19] DsRed2 단백질의 SDS-PAGE 및 Western Blot 분석결과 115
[그림 20] 유전자변형모기 AAA의 GFP 형광발색 검출결과 118
[그림 21] 사람 거주구역(점선) 및 비거주구역(실선)에서의 장구벌레 환경방출 실험결과. Blue : Aedes aegypt, Green : Aedes albopictus 120
[그림 22] 성체 모기의 환경방출을 통한 확산가능성 실험결과. Red : Wild type, Blue : Aedes albopictus 122
[그림 23] 모기를 매개로 하는 뎅기열병 감염경로 및 국내 발병증례 123
[그림 24] 성체 GM모기 잔류비율에 대한 파나마 환경방출 실험결과 125
[그림 25] Aedes albopictus의 국내 서식환경 126
[그림 26] 유전자변형산물에 대한 Immunoblot analysis 결과 129
[그림 27] 유전자변형 모기 환경방출시험 현황 130
[그림 28] 말레이시아 환경방출 실험지역 131
[그림 29] 케이먼군도 환경방출 실험지역 정보 132
[그림 30] RIDL/SIT 프로그램에 의한 GM모기 환경방출 실험단계 132
[그림 31] 유전자변형 모기 생산시설 전경 134
[그림 32] GM모기 생산 Sector 모식도 134
[그림 33] GM 장구벌레 성별 분리기법 135
[그림 34] Automatic mosquito recapture system 136
[참고 3] 타 부처 소관 LMO 인체위해성 협의심사자료(작성예시) 154
[그림 1] 운반체 및 도입유전자 유전요소 154
[그림 2] PV-○○ 벡터 유전자지도 155
[그림 3] 도입유전자 및 유전요소 지도 155
[그림 4] Probe 정보 및 확인대상 유전자 정보 156
[그림 5] epsps 유전자 발현 아미노산 서열 157
[그림 6] Southern blot 실험결과 162
[그림 7] Southern blot 실험결과 163
[그림 8] PCR을 이용한 유전자변형잔디 BBB 확인 167
[그림 9] western blot 실험결과 169
[그림 10] EPSPS 아미노산 서열정보 171
[참고 4] 유전자변형 모기 환경방출 위해성평가 결과(사례 보고서) 179
Figure 1. 수컷과 암컷 OX513A Aedes aegypti의 선별, 환경방출 및 생존 과정 도식화(GMO 사무국 초안 작성) 179
Figure 2. OX513A의 형질전화에 사용된 플라스미드 지도. 프라이머 위치는 part A의 section 4.1에 기술된 바와 같이 증폭된 플라스미드의... 183
Figure 3. 진단형광현미경에서 OX513A Aedes aegypti 형광마커(DsRed2) 발현. 형광마커는 OX513A 개체를 쉽게 확인할 수 있도록 특징적인... 186
Figure 4. tTAV 시스템의 체계도. tetracycline이 없는 경우(왼쪽 패널), hsp70 프로모터(hsp70)의 효과에 의해 생성된 소량의 tTAV 단백질이... 187
Figure 5. 사바 섬에서의 Aedes aegypti 서식지는 인간 거주지와 거리가 약 100m(빨간색으로 표시)인 지역으로 나타난다. 전체 음영 지역은... 200
Figure 6. (EFSA, 2013)에서 제시되고 Directive 2001/18/EC(2001)에서 해석된 환경위해성평가(ERA)의 6단계 213