단백질 감염 입자를 의미하는 프리온 단백질은 핵산 없이 단백질로만 구성된 감염체이다. 하지만 프리온 단백질(PrPC)은 정상 세포의 표면에서도 발현된다. PrPC 가 변형되면 구조적으로 변형되어 β-sheet 가 풍부한 변형 프리온 단백질(PrPSc)이 된다. PrPSC 가 중추신경계에 축적되면 퇴행성 중추신경계 질환인 프리온 질병이 야기되며 프리온 질병의 전형적인 예로는 양의 스크래피와 소의 소해면상뇌증이 있다. 프리온 질병은 소량의 PrPSc 만 감염되더라도 긴 잠복기를 거치면서 PrPC 를 PrPSc 로 전환시키기 때문에 잠복기가 길고 치사율이 매우 높다. 하지만 현재까지도 프리온 질병에 대한 명확한 진단법은 물론 치료법 또한 없기 때문에 프리온 질병에 대한 진단법 개발이 필수적이다. 재조합 프리온 단백질은 잘못된 단백질 접힘 및 단백질 응집을 연구하는데 매우 유용한 자원이다. 프리온 단백질은 종간 장벽이 높기 때문에 종간 감염을 일으키지 않는 것으로 알려져 있다. 그러나 제방 들쥐의 경우 종간 장벽이 낮은 것으로 알려져 다른 종의 프리온에도 감염이 된다고 알려져 프리온 질병 연구에 유용하게 활용될 수 있다. 본 연구에서는 재조합 제방 들쥐 프리온 단백질을 대장균을 이용하여 발현 및 정제하였으며, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석을 이용하여 분석하였다. 우리는 pET100/D-TOPO 벡터와 대장균 균주 BL21 을 사용하여 제방 들쥐 프리온 단백질을 클로닝 했다. 배양 중 OD600 이 70 이상일 때 1 mM IPTG 로 발현을 유도하였고, 7 시간 후에 배양을 종료하였다. 세포 용해는 균질기를 이용하여 수행하였고, 봉입체 세척 버퍼와 증류수로 세척하여 불순물을 제거하였다. 그 후 8 M urea 를 이용해 가용화 시키고, 0.1 mM β-mercaptoethanol 이 포함된 재 접힘 버퍼를 사용하여 재 접힘하였다. 재 접힘 된 단백질을 3 단계 정제 크로마토그래피(친화성, 이온 교환 및 역상 크로마토그래피)를 사용하여 정제를 완료하였다. 각 단계별로 SDS-PAGE 와 SKYPAK C8 역상 분석 컬럼을 사용한 HPLC 를 이용하여 정제 여부를 확인했다. 이 방법으로 최종 순도가 98% 이상인 고순도의 재조합 제방 들쥐 단백질을 대량으로 얻었다. 개발된 HPLC 분석 방법의 타당성은 식품의약품안전처 검증 가이드라인에 따라 반복성, 선형성 및 견고성을 확인하여 검증되었다. 이 연구에서 사용한 HPLC 분석법은 다른 종의 프리온 단백질에 적용할 수 있다. 최종 정제된 재조합 제방 들쥐 프리온 단백질의 2 차구조는 CD 스팩트럼 분석을 수행하여 확인하였고, MALDI-TOF 으로 분자량을 확인하였다. 본 연구에서 생산한 재조합 제방 들쥐의 고순도 시료를 활용하면 프리온 단백질 응집 연구나 여러 프리온 관련 연구에 사용할 수 있어 프리온 질병의 진단법 개발 연구에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.